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大鼠少突膠質(zhì)前體細胞的使用和樣本的處理方法介紹

更新時間:2021-11-17點擊次數(shù):1461
  1、收到細胞后,請按照以下方法進行操作:取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
  2、細胞傳代:
  1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,清洗細胞一次。
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1m至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中。
  3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸, 然后按1:2比例進行分瓶傳代,放入379C, 5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
  4)待細胞*貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
  3、細胞凍存:
  1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次。
  2)添加胰蛋白酶消化液約1m至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中。
  3)用適量的凍存液懸細胞,并放置于凍存管中。
  4)先將大鼠少突膠質(zhì)前體細胞凍存管放置于20°C 1.5h,然后將其移,入-80°C過夜, 24h后轉(zhuǎn) 入液氨中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80°C。
  正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的一步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法:
  1.血清。血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單,采血過程中應(yīng)避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準確性。同時也應(yīng)避免細菌污染,因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
  2.血漿。用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融,避免使用溶血或高血脂的標本。
  3.細胞培養(yǎng)上清,取細胞培養(yǎng)上清到離心管,除去細胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
  4.細胞裂解液。
  5.組織勻漿液。
  6、尿液、唾液等其他液體生物樣本。
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