小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）分離自骨髓。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過(guò)程中，受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

　　

　　目前用于分離BMSCs的方法主要有五種，分別是貼壁篩選法、骨組織消化法、密度梯度離心法、免疫磁珠分選法和流式細(xì)胞儀分離法。

　　

　　密度梯度離心法是針對(duì)骨髓中不同細(xì)胞的大小和密度差異進(jìn)行分選，骨髓細(xì)胞懸液加入到密度梯度離心液上面，通過(guò)離心使得不同類型細(xì)胞沉降至其等密度點(diǎn)，然后吸取特定位置富集的細(xì)胞。

　　

　　常見(jiàn)的梯度離心液有Ficoll、Ficoll-Paque、percoll、Lymphopre等，具有低粘性和低滲透性的特性，使用密度約為1.077g/mL。

　　

　　在離心分層時(shí)，紅細(xì)胞及多核細(xì)胞因比重（1.080g/mL）較大而沉降于底部，其次是單個(gè)核細(xì)胞（包括BMSCs、造血干細(xì)胞、單核細(xì)胞等），懸浮密度位于（1.056~1.075）g/mL，血漿及其溶解物懸浮密度位于1.050g/mL。位于分離液之上的灰白色云霧狀層即為單個(gè)核細(xì)胞層，在獲取該層細(xì)胞后再通過(guò)差速貼壁法去除未貼壁細(xì)胞。